玉米黑粉菌现场检测技术的建立与应用研究
作者2019-04-17 10:36未知
由玉米黑粉菌(Ustilago maydis)侵染引起的黑粉病是玉米主要病害之一,可发生在其整个生长发育期。在我国,该病平均发病率达5%~10%,对农业造成严重的经济损失。且传统的检测方法不适合在基层单位展开。因此,建立快速、灵敏、成本适宜的现场检测技术对提升植物病害的检测和防治能力具有重要意义。本文基于U.maydis分子生物学信息分析,选择Pep1,Pit2和See1基因各设计4套引物,从中筛选出1套引物进行反应体系优化和特异性、灵敏度及精密度验证。特异性试验表明,该方法能特异性检测U.maydis,与非靶标菌无交叉反应;灵敏度试验表明,该反应体系的最低检出限为44 fg·μL~(-1)质粒DNA,制作的标准曲线可对U.maydis进行定量分析;对于人工接种冬孢子的土壤样品,LAMP的检测限为1.6×10~3 spores·g~(-1),而对于人工接种的植株样品,发现病原菌在接种第6天后大幅增加;精密度试验表明,其变异系数均小于5%,精密度良好。同时,设计一套用于现场快检的荧光检测仪套箱,该仪器灵敏度及精密度均能达到快检标准。对现场采集的172份田间样品进行检测,共检出139份阳性样品,与荧光定量PCR仪检测结果的符合率高达96%。本研究所建立的U.maydis LAMP现场检测技术具有特异性好、灵敏度高、重复性好等特点,且操作简单,是现场快速、定量检测U.maydis的有效手段。
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