Hi:欢迎来到58硕博论文网     

所有论文科目分类


主页 > 硕博论文 > 核受体LRH-1调控转运体OAT2和多西他赛药动学的研

核受体LRH-1调控转运体OAT2和多西他赛药动学的研

作者2019-04-17 10:30未知
目的:OAT2(Organic anion transporter 2/有机阴离子转运蛋白2)是一种SLC家族摄取转运体,在药物转运与处置中扮演重要角色。解析OAT2表达的调控因子对深入理解药物的动力学行为及其影响因素等具有重要意义。核受体LRH-1(Liver receptor homolog 1/肝受体同系物-1)是一重要转录调节因子,调控多种转运体和代谢酶的表达。然而,LRH-1是否调控OAT2尚不明确。本课题旨在考察LRH-1对OAT2的调控效应,以及阐明调控作用机制。方法:1.分别采用基因高表达和siRNA沉默技术,高表达或敲低Lrh-1。采用实时荧光定量法、蛋白免疫印迹法对Oat2的表达进行检测。采用底物孵育法对Oat2的活性进行测定。2.采用双荧光素酶报告基因技术,考察核受体Lrh-1对Oat2启动子转录活性的影响。结合截断启动子报告基因分析方法,分析核受体Lrh-1与Oat2启动子的作用区域。采用凝胶迁移和染色质免疫共沉淀等生物学技术解析作用位点。3.采用siRNA沉默技术,敲低Lrh-1。采用UPLC-QTOF/MS法,测定不同浓度和不同时间孵育条件下细胞内多西他赛浓度,评价Lrh-1对多西他赛摄取活性的影响。4.基于Lrh-1肝特异性敲除(Lrh-1~(hep-/-))和野生型(Lrh-1~(fl/fl))小鼠模型,采用实时荧光定量法和蛋白免疫印迹法,检测Lrh-1~(hep-/-)和Lrh-1~(fl/fl)小鼠肝脏中基因和蛋白的表达。5.分别采用Lrh-1~(hep-/-)和Lrh-1~(fl/fl)小鼠进行多西他赛药代动力学研究。腹腔注射给予多西他赛(10 mg/kg)。于不同时间点采集血样和肝脏,采用UPLC-QTOF/MS法测定血浆及肝脏药物浓度。基于非房室模型,评价多西他赛在Lrh-1~(hep-/-)和Lrh-1~(fl/fl)小鼠中药动学及组织分布差异。结果:1.核受体LRH-1/Lrh-1调控肝癌细胞中OAT2/Oat2的表达在Hepa1-6细胞中,高表达Lrh-1后,Oat2 m RNA表达升高1.2倍,蛋白表达升高80%;敲低Lrh-1后,Oat2 mRNA表达降低62%,蛋白表达降低55%。此外,敲低Lrh-1后,Hepa1-6细胞对PGE2的摄取减少77%。同时,在HepG2细胞中高表达或敲低LRH-1后,OAT2 mRNA表达也相应升高或降低。2.Lrh-1肝脏敲除下调小鼠Oat2的表达检测结果显示,Lrh-1在Lrh-1~(hep-/-)小鼠肝脏中不表达。Lrh-1的肝脏缺失导致Oat2mRNA表达降低80%。同时,Oat2蛋白在Lrh-1~(hep-/-)小鼠肝脏中表达降低78%。3.核受体Lrh-1为Oat2的转录激活剂双荧光素酶报告基因结果显示,Lrh-1显著增强Oat2启动子活性。Oat2启动子活性与Lrh-1表达量呈正相关。截断启动子报告基因分析显示,Lrh-1调节Oat2启动子活性的核心区域位于-1.1和-0.4 kb之间(即-716至-702 bp区域)。EMSA实验结果显示,Oat2特异性探针与Lrh-1蛋白形成明显的DNA-蛋白复合物。体内CHIP实验结果显示,Lrh-1抗体募集Oat2-LrhRE序列显著增加。数据表明,Lrh-1通过其特异性结合于Oat2启动子-716至-702bp区域而激活Oat2的转录。4.Lrh-1敲低降低多西他赛细胞摄取体外不同时间和不同浓度摄取实验结果显示,敲低Lrh-1后,Hepa1-6细胞对多西他赛的摄取显著降低。数据表明,敲低Lrh-1后Oat2蛋白表达的降低将直接引起Oat2对其底物摄取的减少。5.Lrh-1肝特异性敲除改变多西他赛药动学体内药动学实验结果显示,特异性敲除肝脏Lrh-1后,多西他赛的药动学发生明显改变。与Lrh-1~(fl/fl)小鼠相比,Lrh-1~(hep-/-)小鼠血浆药物暴露量明显增加。相反,在2小时时间内,Lrh-1~(hep-/-)小鼠肝脏中多西他赛浓度相对较低。同时,多西他赛其它肝摄取转运蛋白在Lrh-1~(hep-/-)小鼠肝脏中未发生改变。数据表明,Lrh-1通过调控Oat2的表达来改变肝脏对多西他赛的摄取,从而调节多西他赛的药代动力学及组织分布。结论:本研究首次揭示核受体Lrh-1在转运体Oat2和多西他赛药代动力学调节中的关键作用。Lrh-1通过转录调控Oat2的表达,从而影响Oat2底物药代动力学和组织分布。本研究将有助于理解Oat2底物药物的体内过程,为Oat2底物药物的个体化剂量设置提供参考。
58硕博论文网

最新更新

热门推荐

[硕士论文]企业战略管理视角出发研
本文是 mba论文 ,本论文从企业战略管理的视角出发,依靠文献检索法、调查研究法、对比分析法对案例银行(乌鲁木齐银行)互联网金融竞争环境和因素(外延和内涵)进行了系统而又深入的研究,并综合运用SwOT 分析得出so战略应为乌鲁木齐银行首选的战略,同时给出了-些战略实施的保障措施,以帮助案例银行重新调整竞争模式和发展战略,创新传统的经营模式,以应对新形势下的挑...[全文]
[硕士论文]传统商业银行发展互联网
本文是 mba论文 ,传统商业银行发展互联网金融的主要模式。在互联网金融的强力冲击下,商业银行的金融中介地位逐步弱化,收入来源一再受到冲击,传统的主要收入来源利差收入也难抵颓势。在这样的背景下,传统商业银行唯有积极结合互联网金融并开展相关业务,目前主要模式如下: (一)与互联网企业合作,资源共享 互联网+时代下,跨界合作成为趋势,传统商业银行与...[全文]
[硕士论文]国外金融行业市场进展情
本文是 mba论文 ,随着互联网金融的蓬勃发展,人们分别通过理论研究、市场预测及统计分析等方法对互联网金融及其对传统金融机构的影响,以及在影响之下金融机构采取的战略转型进行了深入研究,并取得了丰硕的成果。下面分别介绍国外相关研究进展情况及发展趋势。 国外研究综述 (一)关于互联网金融对传统金融行业影响的研究 在国外,互联网形式的商业模式和金融业...[全文]
[硕士论文]网络银行金融机构市场主
本文是 mba论文 ,在 20 世纪 90 年代中期,美国出现了一家名为安全第一网络银行(Security First Network Bank, SFNB),正式标志着互联网金融的诞生。随着越来越多的金融科技企业推出高效便捷的金融产品和服务,以网络贷款、网上银行等为代表的金融服务开始在美国金融市场迅速发展,互联网金融企业与传统金融机构开始相互竞争。截至目前,传统金融机构的市场主导地位没有发生...[全文]
[硕士论文]【mpa论文】新媒体视角下
本文是 mpa论文 ,新媒体,从字面意思上理解,就是一种新的媒体形式,是相对于传统媒体而言的。New media是新媒体一词的英文翻译。新媒体概念的提出人是美国的戈尔德马克。从普遍意义上来说,新媒体是继报刊、广播和电视等传统媒体之后发展起来的媒体形态,是通过数字和网络技术,依托互联网平台,以微信、微博、贴吧、论坛等为渠道,向用户传播快捷、广泛的信息、为...[全文]
[硕士论文]地方政府公信力mpa论文研
本文是 mpa论文 ,人无信不立,业无信不兴。同样,国无信必颓,政无信则衰。当前,我国经济和社会发展都取得了重大成就,人们的生活水平也逐步提高,公民参政议政的意识越来越强烈,对政府提出了新的期待。互联网时代,通讯媒体迅速发展,网络信息日益多元化,政府的行政行为都浮现在人们的视线中,一方面加强了对政府工作人员的监督,另一方面信息的多元化网民的...[全文]
关闭窗口 论文咨询